| Хмельницький нацiональний унiверситет |
| Лабораторна робота |
249. Бiологiя
2. Основні принципи культивування мікроорганізмів на живильних середовищах.
Автор: Троян Л.В.
• 1
Текст к ситуации Вас вітає програма віртуальної лабораторної роботи з теми: «Основні принципи культивування мікроорганізмів на живильних середовищах. ». Робота складається з двох частин. Перша частина – це тест, друга – власне лабораторна робота. Перед виконанням тесту потрібно ознайомитися з теоретичними відомостями з теми «Основні принципи культивування мікроорганізмів на живильних середовищах» та рекомендаціями до виконання лабораторної роботи.
Тест містить 5 тестових завдань. Якщо Ви зробите хоча б одну помилку, потрібно буде все починати спочатку. Вам необхідно оформити згідно заданої форми звіт та відправити його викладачу.
Бажаємо успіху!
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 2
2 Теоретичні відомості 101
3 Рекомендації до виконання лабораторної роботи 102
• 2
Текст к ситуации Теоретичні відомості
Основні принципи культивування організмів на живильних середовищах.Для нагромадження мікроорганізмів, дослідження їх фізіологічних і біохімічних властивостей і визначення виду, а також для виділення чистих культур використовують методи культивування мікроорганізмів на поживних середовищах. В якості поживного середовища можна застосовувати: м’ясо - пептонний агар (МПА), м’ясо - пептонний бульйон (МПБ), жовточно - сольовий агар, кров’яний агар, поживний агар. Поживне середовище розливають в стерильні чашки Петрі, котрі стерилізувалися сухим методом в сухожаровій шафі 30 хвилин при температурі 1800С, одну годину при температурі 1700С, дві години при температурі 1600С, при температурі 1500С 2,5 годин, при температурі 1400С – 3 години. Вказаний час не включає фази нагрівання та охолодження.
В залежності від складу виділяють мінеральні і органічні середовища; природні (молоко, кров, соя, бульба) і штучні, які містять суміш природних органічних речовин і продуктів їх кислотного і ферментативного розпаду. Синтетичні середовища містять забуферні сольові основи, розчини амінокислот, вуглеводів, пуринів, нуклеотидів, жирних кислот, вітамінів. Основою штучних органічних середовищ є м’ясна вода, м’ясний екстракт, сої гідролізат. До основи додають хлорид натрію, пептон, кров. Напіврідкі середовища готують із рідких додаючи до них агар (0,5-3 %). В залежності від призначення поживні середовища поділяють на прості (МПА, МПБ, пептонна вода); селективні (які стимулюють ріст одних мікробів і пригнічує інших) і елективні, на яких ростуть певні види або групи видів.
Для приготування мазків використовують 0,9 % розчин NaCl.( фізіологічний розчин).Розчини з іншими концентраціями призводять до руйнування клітини. Якщо розчин містить більшу кількість солі, то такий розчин називається гіпертонічним, якщо меншу- гіпотонічним. При внесенні клітини в гіпертонічний розчин її цитоплазма стискається, при внесенні в гіпотонічний розчин-клітина лопається.
Існують фізичні і хімічні методи фіксації. Перший полягає в тому, що предметне скло з мазком повільно проводять нижньою поверхнею над полум’ям спиртівки. При хімічному методі найчастіше препарат покривають сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру і залишають до випаровування суміші чи опускають мазок у неї на 5 хвилин. Крім етилового, можна використовувати метиловий спирт і інші хімічні речовини.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 3
• 3
Текст к ситуации Готовність до тестування Пане студенте, для подальшого виконання віртуальної лабораторної роботи необхідно отримати допуск до практичних дій. Для цього необхідно відповісти на питання контролю теоретичних знань, які вимагаються для виконання лабораторної роботи. Якщо Ви впевнені у своїх знаннях та готові відповідати на тестові запитання оберіть пункт – «Матеріал засвоєний», якщо Ви потребуєте додаткового вивчення теоретичного матеріалу оберіть пункт – «Матеріал незасвоєний, потребує повторення».
1 Матеріал засвоєний 4
2 Матеріал незасвоєний, потребує повторення 1
• 4
Текст к ситуации Початок тестування При проходженні тестового контролю необхідно звернути увагу на таке:
1. На відповіді виділений обмежений термін. Час, який залишився до закінчення тестування, висвітлюється у верхньому лівому куті екрана монітора комп’ютера. Якщо Ви не надали відповіді у контрольний термін, то відповідь не зараховується.
2. Серед запропонованих відповідей тільки один варіант вірний.
1 Я готовий до здачі тесту 5, 6, 7, 8
2 Я не готовий до здачі тесту 1
• 5
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Для чого використовують методи культивування мікроорганізмів на поживних середовищах.
1 дослідження їх фізіологічних і біохімічних властивостей 9, 10, 11, 12
2 для виявлення належності мікроорганізмів до грам позитивних чи грамнегативних 26
• 6
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации На який термін загружається скляний посуд для стерилізації при температурі 140oС
1 3 години 9, 10, 11, 12
2 2 години 26
• 7
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации На який термін загружається скляний посуд для стерилізації при температурі 170oС
1 1 година 9, 10, 11, 12
2 2 години 26
• 8
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации На який термін загружається скляний посуд для стерилізації при температурі 180oС
1 30 хвилин 9, 10, 11, 12
2 1 година 26
• 9
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации В якій концентрації необхідно додати агар для приготування напіврідких середовищ?
1 0,5 - 3% 13, 14, 15, 16
2 4 - 5% 26
• 10
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации В залежності від призначення які поживні середовища відносяться до простих?
1 МПБ 13, 14, 15, 16
2 середовища з нуклеотидів, жирними кислотами, вітамінами 26
• 11
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации В залежності від призначення які поживні середовища відносяться до синтетичних?
1 середовища з нуклеотидів, жирними кислотами, вітамінами 13, 14, 15, 16
2 МПБ 26
• 12
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации В залежності від призначення які поживні середовища відносяться до селективних?
1 ті, що стимулюють ріст одних мікробів і пригнічує інших 13, 14, 15, 16
2 ті, на яких ростуть всі види мікроорганізмів 26
• 13
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации В залежності від призначення які поживні середовища відносяться до елективних?
1 ті, на яких ростуть певні види або групи видів 17, 18, 19, 20
2 ті, на яких ростуть всі види мікроорганізмів 26
• 14
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации До якої температури необхідно охолодити середовище перед розливом в стерильні чашки Петрі?
1 45- 500С 17, 18, 19, 20
2 20-300С 26
• 15
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации При якій температурі ставлять чашки з посівом в термостат для культивування мікроорганізмів?
1 370С на одну добу. 17, 18, 19, 20
2 390С на пів доби 26
• 16
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Який розчин NaCl для приготування мазків рахується фізіологічним?
1 0,9% 17, 18, 19, 20
2 0,5 % 26
• 17
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Який розчин NaCl рахується гіпертонічним?
1 2,0 % 21, 22, 23, 24
2 0,5 % 26
• 18
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Який розчин NaCl рахується гіпотонічним?
1 0,5% 21, 22, 23, 24
2 0,9% 26
• 19
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Що відбувається з клітиною при внесенні в клітину гіпертонічного розчину?
1 її цитоплазма стискається 21, 22, 23, 24
2 клітина лопається 26
• 20
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Що відбувається з клітиною при внесенні в неї гіпотонічного розчину?
1 клітина лопається 21, 22, 23, 24
2 її цитоплазма стискається 26
• 21
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Як називається розподілення тонким шаром досліджуваної культури на скельці в фізіологічному розчині?
1 дифундування 25
2 концентрування 26
• 22
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Чи всі бактеріологічні культури, які готуються до фарбування необхідно зафіксувати?
1 так 25
2 ні 26
• 23
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации При хімічному методі фіксації виконують наступні дії:
1 препарат покривають сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру 25
2 предметне скло з мазком повільно проводять нижньою поверхнею над полум’ям спиртівки 26
• 24
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации При фізичному методі фіксації виконують наступні дії:
1 предметне скло з мазком повільно проводять нижньою поверхнею над полум’ям спиртівки 25
2 препарат покривають сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру 26
• 25
Текст к ситуации Ви успішно закінчили тестування!
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 27
• 26
Текст к ситуации Ви не пройшли тестування! Для підготовки до повторного тестування потрібно ще раз ознайомитися з теоретичними відомостями з теми «Біологія» та рекомендаціями до виконання лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 1
• 27
Иллюстрация к шагу 0249-02-027.mp4
Текст к ситуации Виконуємо лабораторну роботу: “Основні принципи культивування мікроорганізмів на живильних середовищах”. Мета: ознайомлення з методами і технікою посіву мікроорганізмів на поживному середовищі і відпрацювати техніку готування мазків.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 28
• 28
Иллюстрация к шагу 0249-02-028.mp4
Текст к ситуации Готуємо поживний агар
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 29
• 29
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Скільки необхідно сухого поживного агару для приготування 1 л середовища: (кип’ячіння 1-2 хвилини до повного розчинення агару)
1 38,0 г 30
2 10,0 45
• 30
Иллюстрация к шагу 0249-02-030.mp4
Текст к ситуации Розливаємо агар в стерильні флакони і стерилізувати на протязі 15 хв. автоклавуванням при температурі:
1 121oС 31
2 180oС 26
• 31
Иллюстрация к шагу 0249-02-031.mp4
Текст к ситуации При відсутності автоклава можна здійснити стерилізацію багаторазовим прогріванням розчинів на водяній бані при температурі 100oС .
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 32
• 32
Иллюстрация к шагу 0249-02-032.mp4
Текст к ситуации Перед розливом в стерильні чашки Петрі середовище необхідно охолодити до температури:
1 45-50oС 33
2 20-30oС 46
• 33
Иллюстрация к шагу 0249-02-033.mp4
Текст к ситуации Перед посівом чашки Петрі з охолодженим агаром ставлять в термостат на одну добу для перевірки стерильності агару. Якщо агар в чашці не проріс, то можна здійснювати запланований посів.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 34
• 34
Иллюстрация к шагу 0249-02-034.mp4
Текст к ситуации Проводимо посів досліджуваного матеріалу на поживне середовище або стерильним тампоном з досліджуваним матеріалом, або бактеріологічною петлею, або розпреділяємо за допомогою стерильного шпателя.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 35
• 35
Иллюстрация к шагу 0249-02-035.mp4
Текст к ситуации На чашках Петрі пишуть олівцем по склу дату і час посіву, після чого ставлять в термостат для культивування мікроорганізмів одну добу при температурі:
1 37oС 36
2 39oС 47
• 36
Иллюстрация к шагу 0249-02-036.mp4
Текст к ситуации Через добу готують препарати для мікроскопічних досліджень (мазки)
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 37
• 37
Иллюстрация к шагу 0249-02-037.mp4
Текст к ситуации Приготування мазків Мазки готують на спеціальному предметному склі, що завчасно ретельно очищають кип’ятінням у мильному розчині чи в 1 %-вому розчині соди протягом 10-20 хв., потім ополіскують дистильованою водою.
На знежирене предметне скло у краплину фізіологічного розчину (0,9 % розчин NaCl) бактеріологічною петлею, попередньо прокаленою над полум’ям спиртівки і охолодженою беруть досліджувану культуру і розподіляють тонким шаром (дифундують).
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 40
• 40
Иллюстрация к шагу 0249-02-040.mp4
Текст к ситуации Всі бактеріологічні культури, які готуються до фарбування необхідно зафіксувати. Фізичний метод фіксації полягає в тому, що предметне скло з мазком повільно проводять нижньою поверхнею над полум’ям спиртівки.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 42
• 42
Иллюстрация к шагу 0249-02-042.mp4
Текст к ситуации При хімічному методі найчастіше препарат покривають сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру і залишають до випаровування суміші чи опускають мазок у неї на 5 хвилин і висушують. Препарат готовий до фарбування.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 43
• 43
Текст к ситуации Вітаємо! Ви успішно виконали лабораторну роботу:
“Основні принципи культивування мікроорганізмів на живильних середовищах”.Тепер оформіть звіт з лабораторної роботи згідно представленого зразка, запишіть його окремим файлом та і відправте викладачу зі своєї персональної сторінки.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 44
• 44
Текст к ситуации Оформіть протокол та вишліть його викладачу Лабораторна робота № 2
Тема. Основні принципи культивування організмів на живильних середовищах.
Мета: ознайомлення з методами і технікою посіву мікроорганізмів на
поживному середовищі і відпрацювати техніку готування мазків.
Обладнання і матеріали: чашки Петрі, предметні скельця, олівець по склу, бактеріологічна петля, спиртівка, поживний агар, 1 %-вий розчин соди, дистильована вода, 0,9 % розчин NaCl, спирт етиловий.
Хід роботи
1. Для приготування поживного агару необхідно: 38,0 г сухого поживного агару розмішати в 1 л дистильованої води, прокип’ятити 1-2 хвилини до повного розчинення агару, розлити в стерильні флакони і стерилізувати автоклавуванням при температурі 1210С на протязі 15 хв. При відсутності автоклава можна здійснити стерилізацію багаторазовим прогріванням розчинів на водяній бані при температурі 1000С . Середовище охолодити до температури 45-500С і розлити в стерильні чашки Петрі. Перед посівом чашки Петрі з охолодженим агаром ставлять в термостат на одну добу для перевірки стерильності агару. Якщо агар в чашці не проріс, то можна здійснювати запланований посів.
2. Проводять посів досліджуваного матеріалу на поживне середовище або стерильним тампоном з досліджуваним матеріалом, або бактеріологічною петлею, або розподіляють за допомогою стерильного шпателя. На чашках Петрі пишуть олівцем по склу дату і час посіву, після чого ставлять в термостат для культивування мікроорганізмів при температурі 370С на одну добу.
3. Препарати для мікроскопічних досліджень (мазки) готують на спеціальному предметному склі, що завчасно ретельно очищають кип’ятінням у мильному розчині чи в 1 %-вому розчині соди протягом 10-20 хв., потім ополіскують дистильованою водою.
4. Для приготування мазків використовують 0,9 % розчин NaCl.( фізіологічний розчин).
На знежирене предметне скло у краплину фізіологічного розчину (0,9 % розчин NaCl) бактеріологічною петлею, попередньо прокаленою над полум’ям спиртівки і охолодженою беруть досліджувану культуру і розподіляють тонким шаром (дифундують).
5. Всі бактеріологічні культури, які готуються до фарбування необхідно зафіксувати.
Існують. Фізичний метод фіксації: предметне скло з мазком повільно проводять нижньою поверхнею над полум’ям спиртівки
Хімічний метод фіксації: препарат покривають сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру і залишають до випаровування суміші чи опускають мазок у неї на 5 хвилин.
Зробіть висновок, в якій послідовності необхідно готувати мазок для фарбування, щоб досліджувані мікробіологічні клітини не зруйнувалися?
Висновок відіслати викладачу як звіт про виконання лабораторної роботи.
• 45
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 29
• 46
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 31
• 47
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 34
• 101
Текст к ситуации Основні принципи культивування організмів на живильних середовищах.
Для нагромадження мікроорганізмів, дослідження їх фізіологічних і біохімічних властивостей і визначення виду, а також для виділення чистих культур використовують методи культивування мікроорганізмів на поживних середовищах. В якості поживного середовища можна застосовувати: м’ясо - пептонний агар (МПА), м’ясо - пептонний бульйон (МПБ), жовточно - сольовий агар, кров’яний агар, поживний агар. Поживне середовище розливають в стерильні чашки Петрі, котрі стерилізувалися сухим методом в сухожаровій шафі 30 хвилин при температурі 1800С ,одну годину при температурі 1700 , дві години при температурі 1600, при температурі 1500 2, 5 годин, при температурі 140 0С – 3 години. Вказаний час не включає фази нагрівання та охолодження.
В залежності від складу виділяють мінеральні і органічні середовища; природні (молоко, кров, соя, бульба) і штучні, які містять суміш природних органічних речовин і продуктів їх кислотного і ферментативного розпаду. Синтетичні середовища містять забуферні сольові основи, розчини амінокислот, вуглеводів, пуринів, нуклеотидів, жирних кислот, вітамінів. Основою штучних органічних середовищ є м’ясна вода, м’ясний екстракт, сої гідролізат. До основи додають хлорид натрію, пептон, кров. Напіврідкі середовища готують із рідких додаючи до них агар (0,5-3 %). В залежності від призначення поживні середовища поділяють на прості (МПА, МПБ, пептонна вода); селективні (які стимулюють ріст одних мікробів і пригнічує інших) і елективні, на яких ростуть певні види або групи видів.
Для приготування мазків використовують 0,9 % розчин NaCl.( фізіологічний розчин).Розчини з іншими концентраціями призводять до руйнування клітини. Якщо розчин містить більшу кількість солі, то такий розчин називається гіпертонічним, якщо меншу- гіпотонічним. При внесенні клітини в гіпертонічний розчин її цитоплазма стискається, при внесенні в гіпотонічний розчин-клітина лопається.
Існують фізичні і хімічні методи фіксації. Перший полягає в тому, що предметне скло з мазком повільно проводять нижньою поверхнею над полум’ям спиртівки. При хімічному методі найчастіше препарат покривають сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру і залишають до випаровування суміші чи опускають мазок у неї на 5 хвилин. Крім етилового, можна використовувати метиловий спирт і інші хімічні речовини.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 1
• 102
Текст к ситуации Лабораторна робота № 2
Тема. Основні принципи культивування організмів на живильних середовищах.
Мета: ознайомлення з методами і технікою посіву мікроорганізмів на
поживному середовищі і відпрацювати техніку готування мазків.
Обладнання і матеріали: чашки Петрі, предметні скельця, олівець по склу, бактеріологічна петля, спиртівка, поживний агар, 1 %-вий розчин соди, дистильована вода, 0,9 % розчин NaCl, спирт етиловий.
Хід роботи
1. Для приготування поживного агару необхідно: 38,0 г сухого поживного агару розмішати в 1 л дистильованої води, прокип’ятити 1-2 хвилини до повного розчинення агару, розлити в стерильні флакони і стерилізувати автоклавуванням при температурі 1210С на протязі 15 хв. При відсутності автоклава можна здійснити стерилізацію багаторазовим прогріванням розчинів на водяній бані при температурі 1000С . Середовище охолодити до температури 45-500С і розлити в стерильні чашки Петрі. Перед посівом чашки Петрі з охолодженим агаром ставлять в термостат на одну добу для перевірки стерильності агару. Якщо агар в чашці не проріс, то можна здійснювати запланований посів.
2. Проводять посів досліджуваного матеріалу на поживне середовище або стерильним тампоном з досліджуваним матеріалом, або бактеріологічною петлею, або розподіляють за допомогою стерильного шпателя. На чашках Петрі пишуть олівцем по склу дату і час посіву, після чого ставлять в термостат для культивування мікроорганізмів при температурі 370С на одну добу.
3. Препарати для мікроскопічних досліджень (мазки) готують на спеціальному предметному склі, що завчасно ретельно очищають кип’ятінням у мильному розчині чи в 1 %-вому розчині соди протягом 10-20 хв., потім ополіскують дистильованою водою.
4. Для приготування мазків використовують 0,9 % розчин NaCl.( фізіологічний розчин).
На знежирене предметне скло у краплину фізіологічного розчину (0,9 % розчин NaCl) бактеріологічною петлею, попередньо прокаленою над полум’ям спиртівки і охолодженою беруть досліджувану культуру і розподіляють тонким шаром (дифундують).
5. Всі бактеріологічні культури, які готуються до фарбування необхідно зафіксувати.
Існують. Фізичний метод фіксації: предметне скло з мазком повільно проводять нижньою поверхнею над полум’ям спиртівки
Хімічний метод фіксації: препарат покривають сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру і залишають до випаровування суміші чи опускають мазок у неї на 5 хвилин.
Зробіть висновок, в якій послідовності необхідно готувати мазок для фарбування, щоб досліджувані мікробіологічні клітини не зруйнувалися?
Висновок відіслати викладачу як звіт про виконання лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 1