Лабораторна робота № 2

Тема. Основні принципи культивування організмів на живильних середовищах.

Мета: ознайомлення з методами і технікою посіву мікроорганізмів на

поживному середовищі і відпрацювати техніку готування мазків.

Обладнання і матеріали: чашки Петрі, предметні скельця, олівець по склу, бактеріологічна петля, спиртівка, поживний агар, 1 %-вий розчин соди, дистильована вода, 0,9 % розчин NaCl, спирт етиловий.

Хід роботи

1. Для приготування поживного агару необхідно: 38,0 г сухого поживного агару розмішати в 1 л дистильованої води, прокип’ятити 1-2 хвилини до повного розчинення агару, розлити в стерильні флакони і стерилізувати автоклавуванням при температурі 121⁰С на протязі 15 хв. При відсутності автоклава можна здійснити стерилізацію багаторазовим прогріванням розчинів на водяній бані при температурі 100⁰С . Середовище охолодити до температури 45-50⁰С і розлити в стерильні чашки Петрі. Перед посівом чашки Петрі з охолодженим агаром ставлять в термостат на одну добу для перевірки стерильності агару. Якщо агар в чашці не проріс, то можна здійснювати запланований посів.

2. Проводять посів досліджуваного матеріалу на поживне середовище або стерильним тампоном з досліджуваним матеріалом, або бактеріологічною петлею, або розподіляють за допомогою стерильного шпателя. На чашках Петрі пишуть олівцем по склу дату і час посіву, після чого ставлять в термостат для культивування мікроорганізмів при температурі 37⁰С на одну добу.

3. Препарати для мікроскопічних досліджень (мазки) готують на спеціальному предметному склі, що завчасно ретельно очищають кип’ятінням у мильному розчині чи в 1 %-вому розчині соди протягом 10-20 хв., потім ополіскують дистильованою водою.

4. Для приготування мазків використовують 0,9 % розчин NaCl.( фізіологічний розчин).

На знежирене предметне скло у краплину фізіологічного розчину (0,9 % розчин NaCl) бактеріологічною петлею, попередньо прокаленою над полум’ям спиртівки і охолодженою беруть досліджувану культуру і розподіляють тонким шаром (дифундують).

5. Всі бактеріологічні культури, які готуються до фарбування необхідно зафіксувати.

Існують. Фізичний метод фіксації: предметне скло з мазком повільно проводять нижньою поверхнею над полум’ям спиртівки

Хімічний метод фіксації: препарат покривають сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру і залишають до випаровування суміші чи опускають мазок у неї на 5 хвилин.

Зробіть висновок, в якій послідовності необхідно готувати мазок для фарбування, щоб досліджувані мікробіологічні клітини не зруйнувалися?

Висновок відіслати викладачу як звіт про виконання лабораторної роботи.