Хмельницький нацiональний унiверситет 
 Бiологiя
Лабораторна робота: Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом

Лабораторна робота № 3

Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом

Теоретичні відомості

Дослідження бактерій у фарбованому вигляді дає можливість не лише вивчити їх морфологію, але і дозволяє судити про деякі деталі їх хімічної будови. Це досягається застосуванням спеціальних фарбувань.

Найчастіше серед дифференційованих фарбувань використовується метод за Грамом.

Грам метод - метод дифференційованого фарбування бактерій, при якому одні бактерії фарбуються в темно-фіолетовий колір (грампозитивні бактерії), інші – в червоний чи рожевий ( грамнегативні бактерії). Суть метода в тому, що хімічний склад оболонки і цитоплазми мікроорганізмів різний, вони по-різному фарбуються тими самими фарбами, що являється класифікаційною особливістю. У мікроорганізмів, що забарвлюються за Грамом, генціанвіолет у присутності йоду (розчин Люголя) в оболонці і цитоплазмі утворює стійку сполуку, що не руйнується спиртом протягом 30 хвилин, тому вони залишаються фіолетовими. Клітини видів, що не забарвлюються за Грамом, цими властивостями не володіють, і спирт знебарвлює їх, а при наступному дофарбуванні фуксином вони набувають червоного кольору.

Клітинна стінка (оболонка) бактерій – структура бактерій і грибів, що розташована між цитоплазматичною мембраною і капсулою ( якщо така є), або іонізованим шаром зовнішнього середовища. Має товщину від 10 до 35 нм. Головним і специфічним компонентом для клітинної стінки є муреїн, або пептидоглікан.

У грам + бактерій клітинна стінка на 80% складається з з пептидогліканів, з’єднаних з тейхоєвою кислотою. При електронному мікроскопуванні відносно однорідна.

У грам - бактерій клітинна стінка слоїста. Внутрішній шар побудований пептидогліканами, але без тейхоєвих кислот. Він менш товстий і погано проникний для бензилпеніцилліну та лізоциму, ніж аналогічний шар у грампозитивних бактерій. Зовнішній шар ( зовнішня мембрана) складвється із поліцукрів і ліпопротеїну.

Грамнегативні бактерії фарбуються за методом Грама додатковим барвником в рожевий чи червоний колір. До грам негативних бактерій відносяться нейсерії, ентеробактерії, вібріони, псевдомонади, спірили, бактероїди, рикетсії, спірохети, мікоплазми. В порівнянні з грампозитивними бактеріями для них характерні чутливість до лугів, протеолітичним ферментам, резистентність до бензилпеніцилліну, граміцидину.

Грампозитивні бактерії фарбуються за методом Грама темно-фіолетовий колір. До них належать бацили, клострідії, коринебактерії, мікобактерії, стафілококки, стрептококи, лактобацилли, лістерії, більшість актиноміцетів. В порівнянні з грамнегативними бактеріями для них характерні резистентність до лугів, протеолітичних ферментів, чутливі до бензилпеніцилліну, граміцидину, йоду, лізоциму; деякі види кислотостійкі, багато з них утворюють ендоспори..

Продовжити виконання лабораторної роботи