Хмельницький нацiональний унiверситет 
 Бiологiя
Лабораторна робота: Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом

Лабораторна робота №3

Тема. Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом

Мета: ознайомлення з методами фарбування препаратів і відпрацювання техніки фарбування мазків складним методом за Грамом.

Обладнання і матеріали: фіксований мазок, фільтрувальний папір, розчин карболового генціанвіолету, розчин Люголя, 96 % спирт, дистильована вода, фуксин Циля.

Хід роботи

Для вивчення форм, розміру клітин, морфологічних властивостей використовують прості і складні методи фарбування.

Простий метод фарбування. При цьому методі фарбування використовується одна фарба. На фіксований мазок наливають декілька крапель розчину фуксину чи метиленового синього на 1-2 хвилини, потім фарбу промивають водою, висушують мазок фільтрувальним папером і розглядають з імерсійним маслом під мікроскопом.

Складний метод фарбування. Для складного фарбування застосовують декілька фарб. У лабораторній практиці зі складних методів фарбування найчастіше застосовують фарбування за Грамом.

1. Для цього на фіксований мазок, покритий смужкою фільтрувального паперу, наливають розчин карболового генціанвіолету на 1-2 хвилини.

2. Зливають фарбу і, не промиваючи водою, наливають на мазок розчин Люголя на 1-2 хвилини.

3. Зливають розчин Люголя і, не промиваючи водою, занурюють в стаканчик з 96 % спиртом на 25-30 хвилин.

4. Ополіскують мазок дистильованою водою і дофарбовують розчином фуксину Циля (1-2 хвилини), зливають фарбу, промивають водою і висушують фільтрувальним папером.

У зв’язку з тим, що хімічний склад оболонки і цитоплазми мікроорганізмів різний, вони по-різному фарбуються тими самими фарбами, що являється класифікаційною особливістю. У мікроорганізмів, що забарвлюються за Грамом, генціанвіолет у присутності йоду (розчин Люголя) в оболонці і цитоплазмі утворює стійку сполуку, що не руйнується спиртом протягом 30 хвилин, тому вони залишаються фіолетовими. Клітини видів, що не забарвлюються за Грамом, цими властивостями не володіють, і спирт знебарвлює їх, а при наступному дофарбуванні фуксином вони набувають червоного кольору.

Зробіть висновок, чому необхідно дотримуватись саме такої послідовності фарбування мікроорганізмів за методом Грама?

Висновок відіслати викладачу як звіт про виконання лабораторної роботи.

Продовжити виконання лабораторної роботи