| Хмельницький нацiональний унiверситет |
| Лабораторна робота |
249. Бiологiя
3. Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом
Автор: Троян Л.В.
• 1
Текст к ситуации Вас вітає програма віртуальної лабораторної роботи з теми: «Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом». Робота складається з двох частин. Перша частина – це тест, друга – власне лабораторна робота. Перед виконанням тесту потрібно ознайомитися з теоретичними відомостями з теми «Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом» та рекомендаціями до виконання лабораторної роботи.
Тест містить 5 тестових завдань. Якщо Ви зробите хоча б одну помилку, потрібно буде все починати спочатку. Після виконання лабораторної роботи Вам необхідно оформити згідно заданої форми звіт та відправити його викладачу. Бажаємо успіху!
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 2
2 Теоретичні відомості 101
3 Рекомендації до виконання лабораторної роботи 102
• 2
Текст к ситуации Теоретичні відомості
Дослідження бактерій у фарбованому вигляді дає можливість не лише вивчити їх морфологію, але і дозволяє судити про деякі деталі їх хімічної будови. Це досягається застосуванням спеціальних фарбувань.
Найчастіше серед диференційованих фарбувань використовується метод за Грамом.
Грам метод - метод дифференційованого фарбування бактерій, при якому одні бактерії фарбуються в темно-фіолетовий колір (грампозитивні бактерії), інші – в червоний чи рожевий ( грамнегативні бактерії). Суть метода в тому, що хімічний склад оболонки і цитоплазми мікроорганізмів різний, вони по-різному фарбуються тими самими фарбами, що являється класифікаційною особливістю. У мікроорганізмів, що забарвлюються за Грамом, генціанвіолет у присутності йоду (розчин Люголя) в оболонці і цитоплазмі утворює стійку сполуку, що не руйнується спиртом протягом 30 хвилин, тому вони залишаються фіолетовими. Клітини видів, що не забарвлюються за Грамом, цими властивостями не володіють, і спирт знебарвлює їх, а при наступному дофарбуванні фуксином вони набувають червоного кольору.
Клітинна стінка (оболонка) бактерій – структура бактерій і грибів, що розташована між цитоплазматичною мембраною і капсулою ( якщо така є), або іонізованим шаром зовнішнього середовища. Має товщину від 10 до 35 нм. Головним і специфічним компонентом для клітинної стінки є муреїн, або пептидоглікан.
У грам + бактерій клітинна стінка на 80% складається з з пептидогліканів, з’єднаних з тейхоєвою кислотою. При електронному мікроскопуванні відносно однорідна.
У грам - бактерій клітинна стінка слоїста. Внутрішній шар побудований пептидогліканами, але без тейхоєвих кислот. Він менш товстий і погано проникний для бензилпеніцилліну та лізоциму, ніж аналогічний шар у грампозитивних бактерій. Зовнішній шар ( зовнішня мембрана) складвється із поліцукрів і ліпопротеїну.
Грамнегативні бактерії фарбуються за методом Грама додатковим барвником в рожевий чи червоний колір. До грам негативних бактерій відносяться нейсерії, ентеробактерії, вібріони, псевдомонади, спірили, бактероїди, рикетсії, спірохети, мікоплазми. В порівнянні з грампозитивними бактеріями для них характерні чутливість до лугів, протеолітичним ферментам, резистентність до бензилпеніцилліну, граміцидину.
Грампозитивні бактерії фарбуються за методом Грама темно-фіолетовий колір. До них належать бацили, клострідії, коринебактерії, мікобактерії, стафілококки, стрептококи, лактобацилли, лістерії, більшість актиноміцетів. В порівнянні з грамнегативними бактеріями для них характерні резистентність до лугів, протеолітичних ферментів, чутливі до бензилпеніцилліну, граміцидину, йоду, лізоциму; деякі види кислотостійкі, багато з них утворюють ендоспори..
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 3
• 3
Текст к ситуации Готовність до тестування Пане студенте, для подальшого виконання віртуальної лабораторної роботи необхідно отримати допуск до практичних дій. Для цього необхідно відповісти на питання контролю теоретичних знань, які вимагаються для виконання лабораторної роботи. Якщо Ви впевнені у своїх знаннях та готові відповідати на тестові запитання оберіть пункт – «Матеріал засвоєний», якщо Ви потребуєте додаткового вивчення теоретичного матеріалу оберіть пункт – «Матеріал незасвоєний, потребує повторення».
1 Матеріал засвоєний 4
2 Матеріал незасвоєний, потребує повторення 1
• 4
Текст к ситуации Початок тестування. При проходженні тестового контролю необхідно звернути увагу на таке:
1.На відповіді виділений обмежений термін. Час, який залишився до закінчення тестування, висвітлюється у верхньому лівому куті екрана монітора комп’ютера. Якщо Ви не надали відповіді у контрольний термін, то відповідь не зараховується.
2.Серед запропонованих відповідей тільки один варіант вірний.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 5
• 5
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации В який колір фарбуються бактерії при Грам методі ?
1 темно-фіолетовий колір 9, 10, 11, 12
2 жовтий колір 26
• 6
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации В який колір фарбуються грампозитивні бактерії при Грам методі?
1 темно-фіолетовий колір 9, 10, 11, 12
2 в червоний чи рожевий 26
• 7
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации В який колір фарбуються грамнегативні бактерії при Грам методі?
1 в червоний чи рожевий 9, 10, 11, 12
2 темно-фіолетовий колір 26
• 8
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Чому мікроорганізми залишаються фіолетовими при фарбуванні за Грамом?
1 генціанвіолет у присутності йоду (розчин Люголя) в оболонці і цитоплазмі утворює стійку сполуку 9, 10, 11, 12
2 спирт знебарвлює генціанвіолет 26
• 9
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Які компоненти є головними і специфічними для клітинної стінки бактерій?
1 муреїн, або пептидоглікан 13, 14, 15, 16
2 лізоцим і фосфоліпіди 26
• 10
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Яку товщину має клітинна стінка бактерій?
1 від 10 до 35 нм. 13, 14, 15, 16
2 від 100 до 300 нм. 26
• 11
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Яку будову має клітинна стінка грам + бактерій?
1 складається з пептидогліканів, з’єднаних з тейхоєвою кислотою 13, 14, 15, 16
2 побудована пептидогліканами, але без тейхоєвих кислот 26
• 12
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Яку будову має клітинна стінка грам - бактерій?
1 побудована пептидогліканами, але без тейхоєвих кислот 13, 14, 15, 16
2 складається з пептидогліканів, з’єднаних з тейхоєвою кислотою 26
• 13
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Які бактерії відносяться до грамнегативних?
1 ентеробактерії, вібріони 17, 18, 19, 20
2 стафілококки, стрептококки 26
• 14
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Які бактерії відносяться до грампозитивних?
1 карболового генціанвіолету 17, 18, 19, 20
2 фуксин Циля 26
• 15
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Який розчин наливають на мазок в другу чергу?
1 Люголя 17, 18, 19, 20
2 фуксин Циля 26
• 16
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Який розчин наливають на мазок найпершим?
1 карболового генціанвіолету 17, 18, 19, 20
2 фуксин Циля 26
• 17
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Який розчин наливають на мазок третім?
1 фуксин Циля 21, 22, 23, 24
2 Люголя 26
• 18
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Після фарбування яким барвником мазок занурюють в стаканчик з 96 % спиртом?
1 Люголя 21, 22, 23, 24
2 Фуксину Циля 26
• 19
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации На який термін мазок занурюють в стаканчик з 96 % спиртом?
1 на 25-30 хвилин 21, 22, 23, 24
2 на 1-2 хв 26
• 20
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Розчином якого барвника дофарбовують мазок після знебарвлення його в спирті?
1 Фуксином Циля 21, 22, 23, 24
2 р-ном Люголя 26
• 21
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Скільки фарб використовується при простому методі фарбування ?
1 одна фарба 25
2 дві фарби 26
• 22
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации На який термін наливають на фіксований мазок фарбу при простому методі фарбування?
1 на 1-2 хвилини 25
2 на 5-10 хв 26
• 23
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Чи необхідно фіксувати мазок при фарбуванні складним методом?
1 Так 25
2 Ні 26
• 24
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Чи необхідно мазок фарбований простим методом розглядати з імерсійним маслом?
1 так 25
2 ні 26
• 25
Текст к ситуации Ви успішно закінчили тестування!
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 26
• 26
Текст к ситуации Ви не пройшли тестування! Для підготовки до повторного тестування потрібно ще раз ознайомитися з теоретичними відомостями з теми «Біологія» та рекомендаціями до виконання лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 1
• 27
Иллюстрация к шагу 0249-03-027.mp4
Текст к ситуации Тема лабораторної роботи: “Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом” Мета: ознайомлення з методами фарбування препаратів і відпрацювання техніки фарбування мазків складним методом за Грамом.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 28
• 28
Иллюстрация к шагу 0249-03-028.mp4
Текст к ситуации Простий метод фарбування
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 29
• 29
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Вибрати реактиви, що наносяться на фіксований мазок при простому методі: (1-2 хв)
1 розчин Люголя, розчин фуксину, генціанвіолету 41
2 розчин фуксину чи метиленового синього 30
• 30
Текст к ситуации Фарбу промивають водою, висушують мазок фільтрувальним папером і розглядають з імерсійним маслом під мікроскопом
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 31
• 31
Ограничение времени 1 минут
Иллюстрация к шагу 0249-03-031.mp4
Текст к ситуации Складний метод фарбування
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 32
• 32
Ограничение времени 1 минут
Иллюстрация к шагу 0249-03-032.mp4
Текст к ситуации Вибрати мазок для фарбування за грамом:
1 фіксований мазок 33
2 нефіксований мазок 42
• 33
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Який розчин наливають на 1-2 хвилини на препарат першим?
1 карболового генціанвіолету 34
2 розчин фуксину 43
• 34
Иллюстрация к шагу 0249-03-034.mp4
Текст к ситуации Який розчин наливають на 1-2 хвилини на препарат другим ?
1 розчин Люголя 35
2 розчин фуксину 44
• 35
Иллюстрация к шагу 0249-03-035.mp4
Текст к ситуации Вибрати реактив для вимивання генціанвіолету з бактеріальної клітини:
1 96% спирт 36
2 розчин фуксину 45
• 36
Иллюстрация к шагу 0249-03-036.mp4
Текст к ситуации Ополіскують мазок дистильованою водою
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 37
• 37
Ограничение времени 1 минут
Текст к ситуации Вибрати реактив, яким дофарбовують (1-2 хвилини) знебарвлений препарат?
1 розчином фуксину Циля 38
2 розчин Люголя 46
• 38
Иллюстрация к шагу 0249-03-038.mp4
Текст к ситуации Зливають фарбу, промивають водою і висушують фільтрувальним папером. Розглядають препарат з імерсійним маслом під мікроскопом при збільшенні об’єктива на 90
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 39
• 39
Текст к ситуации Вітаємо! Ви успішно виконали лабораторну роботу. Тепер оформіть звіт з лабораторної роботи згідно представленого зразка, запишіть його окремим файлом та і відправте викладачу зі своєї персональної сторінки.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 40
• 40
Текст к ситуации Оформіть протокол та вишліть його викладачу Лабораторна робота №3
Тема. Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом
Мета: ознайомлення з методами фарбування препаратів і відпрацювання техніки фарбування мазків складним методом за Грамом.
Обладнання і матеріали: фіксований мазок, фільтрувальний папір, розчин карболового генціанвіолету, розчин Люголя, 96 % спирт, дистильована вода, фуксин Циля.
Хід роботи
Для вивчення форм, розміру клітин, морфологічних властивостей використовують прості і складні методи фарбування.
Простий метод фарбування. При цьому методі фарбування використовується одна фарба. На фіксований мазок наливають декілька крапель розчину фуксину чи метиленового синього на 1-2 хвилини, потім фарбу промивають водою, висушують мазок фільтрувальним папером і розглядають з імерсійним маслом під мікроскопом.
Складний метод фарбування. Для складного фарбування застосовують декілька фарб. У лабораторній практиці зі складних методів фарбування найчастіше застосовують фарбування за Грамом.
1. Для цього на фіксований мазок, покритий смужкою фільтрувального паперу, наливають розчин карболового генціанвіолету на 1-2 хвилини.
2. Зливають фарбу і, не промиваючи водою, наливають на мазок розчин Люголя на 1-2 хвилини.
3. Зливають розчин Люголя і, не промиваючи водою, занурюють в стаканчик з 96 % спиртом на 25-30 хвилин.
4. Ополіскують мазок дистильованою водою і дофарбовують розчином фуксину Циля (1-2 хвилини), зливають фарбу, промивають водою і висушують фільтрувальним папером.
У зв’язку з тим, що хімічний склад оболонки і цитоплазми мікроорганізмів різний, вони по-різному фарбуються тими самими фарбами, що являється класифікаційною особливістю. У мікроорганізмів, що забарвлюються за Грамом, генціанвіолет у присутності йоду (розчин Люголя) в оболонці і цитоплазмі утворює стійку сполуку, що не руйнується спиртом протягом 30 хвилин, тому вони залишаються фіолетовими. Клітини видів, що не забарвлюються за Грамом, цими властивостями не володіють, і спирт знебарвлює їх, а при наступному дофарбуванні фуксином вони набувають червоного кольору.
Зробіть висновок, чому необхідно дотримуватись саме такої послідовності фарбування мікроорганізмів за методом Грама?
Висновок відіслати викладачу як звіт про виконання лабораторної роботи.
• 41
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 28
• 42
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 31
• 43
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 32
• 44
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 33
• 45
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 34
• 46
Текст к ситуации Помилка тесту виконання лабораторної роботи.
На жаль, Ви обрали неправильний варіант відповіді.
Вам необхідно повторити цей крок лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 36
• 101
Текст к ситуации Лабораторна робота № 3
Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом
Теоретичні відомості
Дослідження бактерій у фарбованому вигляді дає можливість не лише вивчити їх морфологію, але і дозволяє судити про деякі деталі їх хімічної будови. Це досягається застосуванням спеціальних фарбувань.
Найчастіше серед дифференційованих фарбувань використовується метод за Грамом.
Грам метод - метод дифференційованого фарбування бактерій, при якому одні бактерії фарбуються в темно-фіолетовий колір (грампозитивні бактерії), інші – в червоний чи рожевий ( грамнегативні бактерії). Суть метода в тому, що хімічний склад оболонки і цитоплазми мікроорганізмів різний, вони по-різному фарбуються тими самими фарбами, що являється класифікаційною особливістю. У мікроорганізмів, що забарвлюються за Грамом, генціанвіолет у присутності йоду (розчин Люголя) в оболонці і цитоплазмі утворює стійку сполуку, що не руйнується спиртом протягом 30 хвилин, тому вони залишаються фіолетовими. Клітини видів, що не забарвлюються за Грамом, цими властивостями не володіють, і спирт знебарвлює їх, а при наступному дофарбуванні фуксином вони набувають червоного кольору.
Клітинна стінка (оболонка) бактерій – структура бактерій і грибів, що розташована між цитоплазматичною мембраною і капсулою ( якщо така є), або іонізованим шаром зовнішнього середовища. Має товщину від 10 до 35 нм. Головним і специфічним компонентом для клітинної стінки є муреїн, або пептидоглікан.
У грам + бактерій клітинна стінка на 80% складається з з пептидогліканів, з’єднаних з тейхоєвою кислотою. При електронному мікроскопуванні відносно однорідна.
У грам - бактерій клітинна стінка слоїста. Внутрішній шар побудований пептидогліканами, але без тейхоєвих кислот. Він менш товстий і погано проникний для бензилпеніцилліну та лізоциму, ніж аналогічний шар у грампозитивних бактерій. Зовнішній шар ( зовнішня мембрана) складвється із поліцукрів і ліпопротеїну.
Грамнегативні бактерії фарбуються за методом Грама додатковим барвником в рожевий чи червоний колір. До грам негативних бактерій відносяться нейсерії, ентеробактерії, вібріони, псевдомонади, спірили, бактероїди, рикетсії, спірохети, мікоплазми. В порівнянні з грампозитивними бактеріями для них характерні чутливість до лугів, протеолітичним ферментам, резистентність до бензилпеніцилліну, граміцидину.
Грампозитивні бактерії фарбуються за методом Грама темно-фіолетовий колір. До них належать бацили, клострідії, коринебактерії, мікобактерії, стафілококки, стрептококи, лактобацилли, лістерії, більшість актиноміцетів. В порівнянні з грамнегативними бактеріями для них характерні резистентність до лугів, протеолітичних ферментів, чутливі до бензилпеніцилліну, граміцидину, йоду, лізоциму; деякі види кислотостійкі, багато з них утворюють ендоспори..
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 1
• 102
Текст к ситуации Лабораторна робота №3
Тема. Вивчення методики фарбування препаратів мікроорганізмів за Грамом
Мета: ознайомлення з методами фарбування препаратів і відпрацювання техніки фарбування мазків складним методом за Грамом.
Обладнання і матеріали: фіксований мазок, фільтрувальний папір, розчин карболового генціанвіолету, розчин Люголя, 96 % спирт, дистильована вода, фуксин Циля.
Хід роботи
Для вивчення форм, розміру клітин, морфологічних властивостей використовують прості і складні методи фарбування.
Простий метод фарбування. При цьому методі фарбування використовується одна фарба. На фіксований мазок наливають декілька крапель розчину фуксину чи метиленового синього на 1-2 хвилини, потім фарбу промивають водою, висушують мазок фільтрувальним папером і розглядають з імерсійним маслом під мікроскопом.
Складний метод фарбування. Для складного фарбування застосовують декілька фарб. У лабораторній практиці зі складних методів фарбування найчастіше застосовують фарбування за Грамом.
1. Для цього на фіксований мазок, покритий смужкою фільтрувального паперу, наливають розчин карболового генціанвіолету на 1-2 хвилини.
2. Зливають фарбу і, не промиваючи водою, наливають на мазок розчин Люголя на 1-2 хвилини.
3. Зливають розчин Люголя і, не промиваючи водою, занурюють в стаканчик з 96 % спиртом на 25-30 хвилин.
4. Ополіскують мазок дистильованою водою і дофарбовують розчином фуксину Циля (1-2 хвилини), зливають фарбу, промивають водою і висушують фільтрувальним папером.
У зв’язку з тим, що хімічний склад оболонки і цитоплазми мікроорганізмів різний, вони по-різному фарбуються тими самими фарбами, що являється класифікаційною особливістю. У мікроорганізмів, що забарвлюються за Грамом, генціанвіолет у присутності йоду (розчин Люголя) в оболонці і цитоплазмі утворює стійку сполуку, що не руйнується спиртом протягом 30 хвилин, тому вони залишаються фіолетовими. Клітини видів, що не забарвлюються за Грамом, цими властивостями не володіють, і спирт знебарвлює їх, а при наступному дофарбуванні фуксином вони набувають червоного кольору.
Зробіть висновок, чому необхідно дотримуватись саме такої послідовності фарбування мікроорганізмів за методом Грама?
Висновок відіслати викладачу як звіт про виконання лабораторної роботи.
1 Продовжити виконання лабораторної роботи 1